品牌 | 其他品牌 | 供货周期 | 现货 |
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应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药 | | |
一、介绍
猪蓝耳病毒PCR核酸检测试剂盒是即用型PCR试剂盒的改良产品,含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR增强剂、上样染料等所有PCR所需要的成分,用户只需加入模板和引物即可进行PCR反应,具有广泛的用途。
细胞炎症因子检测试剂盒的主要组成部分包括特异性抗体、酶标记物、底物、标准品和其他辅助试剂。这些试剂共同作用,使得细胞因子能够被特异性地捕获、识别和定量。
1. 方便,用户只需准备模板和引物既可以进行PCR实验。
2. 快捷,操作步骤已经限度地简化,能减少污染,降低实验误差。
3. 本产品A型含电泳染料,PCR反应液可直接上样电泳,进一步简化了操作。
4. 由于各成分的浓度和比例都经过精心优化,反应的灵敏度高,特异性强。能扩增各种常见的DNA样品。
5. 产物可直接用于T载体克隆,不需要额外的加A反应。
使用及效果:将本产品15μL与用户自备的模板,引物和水共15μL混合后,直接进行PCR反应(PCR参数由用户自己确定),反应结束后直接取10μL电泳检查扩增结果。
二、组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)。
2、标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200U/L,100U/L,50U/L,25U/L,12.5U/L,6.25U/L,3.12U/L,样品稀释液直接作为空白孔0U/L。如配制100U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、样品稀释液:1×20ml。
4、检测稀释液A:1×10ml。
5、检测稀释液B:1×10ml。
三、使用及效果:
PCR反应特点:
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。